前言
受不了了,提了这么久RNA,成功率只有两三成。痛定思痛,正所谓碰壁才能进步,一气之下猛学2小时,总结出自己踩过的坑。
正文
RNA降解因素
物理因素:
- 温度
- 紫外辐射
化学因素:
- RNase
- 氧化
- PH
# 加粗的都是我的踩坑点,其他的基本上问题不大
具体表现
一、外界的各类污染
比如有人闲得没事在你加样的时候和你说话,带来了RNA酶。有时候用的枪头不干净、离心管被污染,也会如此。
二、研磨后匀浆裂解时升温
匀浆震荡的时间太长,自然升温/手部温度高导致的热传导,又或是研磨珠搅拌时摩擦生热。应尽量减少非必要的匀浆。
三、离心机没有充分预冷
这是最大的毒点,有时候一个室里面,有人在用离心机且需要室温离心 or 可能有人将要用离心机,我脸皮没那么厚,不敢提前太久开机预冷,导致需要离心的时候机器温度在十几二十度,温度升高降解。
解决办法就是,管其他人用不用,先拿点东西放在离心机旁边预冷,占着茅坑先不拉屎。