实验操作——RNA提取踩雷经验分享

  1. 1. 前言
  2. 2. 正文
    1. 2.1. RNA降解因素
    2. 2.2. 具体表现
      1. 2.2.1. 一、外界的各类污染
      2. 2.2.2. 二、研磨后匀浆裂解时升温
      3. 2.2.3. 三、离心机没有充分预冷

前言

受不了了,提了这么久RNA,成功率只有两三成。痛定思痛,正所谓碰壁才能进步,一气之下猛学2小时,总结出自己踩过的坑。

正文

RNA降解因素

物理因素:

  • 温度
  • 紫外辐射

化学因素:

  • RNase
  • 氧化
  • PH

# 加粗的都是我的踩坑点,其他的基本上问题不大

具体表现

一、外界的各类污染

比如有人闲得没事在你加样的时候和你说话,带来了RNA酶。有时候用的枪头不干净、离心管被污染,也会如此。

二、研磨后匀浆裂解时升温

匀浆震荡的时间太长,自然升温/手部温度高导致的热传导,又或是研磨珠搅拌时摩擦生热。应尽量减少非必要的匀浆。

三、离心机没有充分预冷

这是最大的毒点,有时候一个室里面,有人在用离心机且需要室温离心 or 可能有人将要用离心机,我脸皮没那么厚,不敢提前太久开机预冷,导致需要离心的时候机器温度在十几二十度,温度升高降解

解决办法就是,管其他人用不用,先拿点东西放在离心机旁边预冷,占着茅坑先不拉屎。